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几年来,Sigma Aldrich一直在起诉几项申请(包括USSNS 15/188911;15/188924;和15/456204)声称CRISPR技术(据称)将受到加利福尼亚大学加利福尼亚大学申请第15/9547718和15/981809号的干扰。并保留权利补充其请求,包括加利福尼亚大学伯克利等所有的专利和专利申请(统称为"CVC")以及由广大研究所和同事拥有的专利(见"西格玛奥德里奇想要它的一块脆饼"和"西格玛奥德里奇再试一次")。如果被宣布,就CRISPR-Cas-9专利所有权而言,Sigma–Aldrich威胁要打乱CVC/Broad apple cart,声称优先权日期早于Broad的最早日期,且在CVC的最早日期后3-7个月:

但是,美国专利审查员的立场是,百度专利查询,Sigma Aldrich在获得允许的权利要求之前无权获得干涉声明,并且CVC的早期专利日期阻止了此类许可,除非,Sigma Aldrich可以在较早的专利申请提交日期后宣誓。鉴于专利审判和上诉委员会得出的看似矛盾的结论(参见"PTAB决定CRISPR干扰——事实上无干扰",以及"PTAB决定CRISPR干扰有利于广泛的研究所-他们的推理"和联邦电路(参见加利福尼亚大学的Reunts of V.Brand Institute,Inc.(Fed,C.I. 2018))

最近,Sigma-Aldrich的两项申请打破了僵局,专利局发布了15/188911和15/188924的许可通知。允许的权利要求,包括审查员的修订,如下:

美国申请号15/188911:

1。(当前修订)一种将外源序列整合到真核细胞染色体序列的方法,该方法包括:导入真核细胞:(i)至少一种RNA引导的核酸内切酶或编码至少一种RNA引导的核酸内切酶的核酸,其中至少一种RNA引导的核酸内切酶是聚集的规则分布的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关(Cas)(CRISPR Cas)II型系统蛋白,其中编码CRISPR Cas II型系统蛋白的核酸是优化用于在真核细胞中表达的密码子,其中CRISPR Cas II型系统蛋白为化脓性链球菌Cas9蛋白,包括至少一个核定位信号,该信号由共价连接至Cas9蛋白序列C端氨基酸的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2组成;以及(ii)至少一个工程指导RNA或编码至少一个工程指导RNA的DNA,每个指导RNA包括(1)位于5'端的第一个区域,其碱基与染色体序列中的目标位点配对,以及(2)形成二级结构的第二区域,其和至少一种RNA引导的核酸内切酶相互作用;和(iii)包含所述外源序列的至少一个供体多核苷酸;其中,所述至少一个引导RNA将所述至少一个RNA引导核酸内切酶引导至染色体序列中的目标位点,其中所述RNA引导核酸内切酶引入双链断裂,所述染色体序列中的目标位点紧接着是原间隔基序相邻基序(PAM),佛山版权登记,通过DNA修复过程修复双链断裂,导致外源序列整合到染色体序列中。

8。(原件)根据权利要求1所述的方法,其中所述供体多核苷酸中的外源序列的两侧是与染色体序列中目标位点任一侧的序列具有实质性序列同一性的序列。

9。(先前提出)根据权利要求1所述的方法,其中所述供体多核苷酸中的外源序列进一步包含由所述至少一种RNA引导的核酸内切酶识别的靶向切割位点。

10。(先前提出)根据权利要求1所述的方法,其中编码所述至少一种RNA引导的核酸内切酶的核酸为mRNA

11。(先前提出)根据权利要求1所述的方法,其中编码所述至少一种RNA引导内切酶的核酸为DNA

13。(先前提出)根据权利要求1所述的方法,其中所述真核细胞为人类细胞、非人类哺乳动物细胞或植物细胞。

14。(原件)根据权利要求1所述的方法,其中所述真核细胞是体外的。

15.(原始)根据权利要求1所述的方法,其中所述真核细胞是体内的。

16.(原始)根据权利要求1所述的方法,其中所述至少一种引导RNA是至少部分化学合成的。

18.(先前提出)根据权利要求所述的方法[[19]]1,其中Cas9蛋白来自化脓链球菌菌株MGAS15252,包含SEQ ID NO:9.

20。(当前修订)权利要求[[19]]1的方法,其中共价连接到Cas9蛋白序列的C端氨基酸的至少一个核定位信号包含SEQ ID NO:1.

21。(当前修订)如请求项1之方法,德世久一吃黑的专利号,其中该至少一种RNA引导核酸内切酶包含共价连接至Cas9蛋白质序列之C端氨基酸之至少一个核定位信号,该至少一种RNA引导核酸内切酶包含序列ID NO:2.

22。(先前提出)根据权利要求1所述的方法,其中所述编码所述至少一种RNA引导的核酸内切酶的核酸为mRNA,所述至少一种引导RNA由两个非共价结合的RNA分子组成。

23。(先前提供)根据权利要求1所述的方法,其中编码所述至少一种RNA引导的核酸内切酶的核酸为mRNA,并且所述至少一种引导RNA由单个RNA分子组成。